低聚木糖    食品级低聚木糖      低聚木糖价格报价    低聚木糖生产厂家

1)耐高温木聚糖内切酶的制备：将以耐耐高温木聚糖内切酶基因构建的重组质粒pET-28b-CoXynA热激转化进入EscherichiacoliTransetta(DE3)宿主，构建表达耐高温木聚糖内切酶的基因工程菌。将上述基因工程菌于37℃培养，当菌液OD600值达到0.8时，在37℃条件下，使用异丙基硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导6h，后经高压均质法破碎菌体后，将菌液上清依次过亲和层析柱(镍柱)、阴离子交换柱和分子筛(Superdex75)后制得耐高温木聚糖内切酶酶液(5.1mg/mL)。耐高温木聚糖内切酶在NCBI数据库中的编号为ADQ03732。

2)双功能木聚糖水解酶的制备：将以双功能木聚糖水解酶基因构建的重组质粒pET-28b-CLH10热激转化进入EscherichiacoliBL21-Gold(DE3)宿主，构建表达双功能木聚糖水解酶的基因工程菌。将上述基因工程菌于37℃培养，当菌液OD600值达到0.8时，降温至18℃，在18℃条件下，使用异丙基硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导12h，后经高压均质法破碎菌体后，将菌液上清依次过亲和层析柱(镍柱)和分子筛(Superdex75)后制得双功能木聚糖水解酶酶液(4.9mg/mL)。双功能木聚糖水解酶在NCBI数据库中的编号为WP014043093。

3)底物预处理：将玉米芯粉碎，烘干后过60目筛后称重。

4)酶解反应：在50mL的密闭容器中进行10mL酶催化体系。称取10％wt玉米芯为底物，加入300U/mL双功能木聚糖水解酶。在pH7.0，90℃水浴，摇床转速300rmp，反应24h。向上述所得反应液中加入200U/mL双功能木聚糖水解酶，在75℃水浴摇床，转速200rmp，反应24h，离心获得包含木寡糖的酶解上清液。以灭活的酶液执行相同方法作为空白对照。

5)产物分析：经HPLC分析，产物中含木寡糖324mg，其中木二糖97mg、木三糖178mg、木四糖49mg。